El final de nuestro curso de laboratorio de microbiología ha llegado, fueron muchas las cosas que aprendimos durante nuestro quinto semestre de preparatoria en la capacitación de Laboratorista - Químico a pesar de ser tantas las cosas vistas no abarcamos todo el extenso campo de la microbiología pero estamos preparados con lo básico y ser competentes dentro de este campo que es la microbiología.

 

Para mi fue un placer trabajar arduamente con mis compañeros de equipo, así como del grupo y por supuesto todos nuestros conocimientos se los debemos al apoyo que nos brindo siempre la profesora María e Lourdes Rivera Hernández pues sin mas solo me resta decir que me siento muy contenta de concluir mi curso así como entusiasmada por iniciar uno nuevo en el 6º semestre de preparatoria.

 

 

 

Estos videos sintetizan nuestro curso de microbiología, para que todo este conocimiento quede aun mas claro:


https://www.youtube.com/watch?v=LZR5SPmC1nE

https://www.youtube.com/watch?v=KH8rngaAeio

https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24

https://www.youtube.com/watch?v=Rsjka-28RRc

https://www.youtube.com/watch?v=Ja1Q6Y1W6Ec

 

Pruebas utilizadas en el laboratorio, me pareció muy  interesante la información además de clara.

 

 

 

http://microbitos.files.wordpress.com/2010/06/resumen-de-algunas-pruebas-bioquimicas.pdf

 http://es.slideshare.net/arblait14/catalasacoagulasaoxidasalab-recuperado

 

Propiedades bioquímicas de las bacterias (27/10/14)

 

Pruebas bioquímicas: Utilizados para detectar alguna propiedad fisiológica o bioquímica de un microorganismo constituyendo una herramienta muy importante para su clasificación.

Enzimas: Proteínas altamente especializadas encargadas de catalizar reacciones químicas.

Endoenzimas: enzimas intracelulares cuya función es catalizar reacciones, tanto de síntesis como de degradación.

Exoenzimas: enzimas extracelulares que son excretadas a través de la pared celular al medio ambiente para catalizar reacciones de degradación de macromoléculas. Ejemplo enzimas hidrolizantes, enzimas amiloliticas   y ej. Hidrolisis del almidón.

Las enzimas microbianas se dividen en:

 

a) Hidrolizantes: amiloliticas, sacarariliticas o fermentativas, proteoliticas, lipoliticas.

b) Reductoras y oxidantes: Reductasas y oxidasas.

c) Coagulantes: Coagulasa o fermento lab.coagulasa sanguínea.

d) Citoliticas: Hemolisinas, leucocidinas.

 

Anotaciones en clase de los medios de cultivo:

 

Agar staphylococcus 110

 

·         Medio selectivo.

·         Sirve para aislar staphylococcus: Aureus, epidermis.

·         La presencia de los pigmentos (Cambio de coloración) indica si es – o +.

·         La gelatina es el sultrato de enzima gelatinosa

 

UFC: unidad formadora de colonias-

 

Concentración:

149 g _____________ 1000ml

7.45 g_____________ 50 ml

 

 

 

 

 

 

 

 

Agar Citrato Simmons

 Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y Energía.

 

Resultados:

 

•            Positivo: color azul
• Negativo: color verde

 

 

Concentración:

 

24.2g_____________________1000ml

 1.21g_____________________  50 ml

 

 

 

 

 

 

 

Agar Hierro Kliger

·         Utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la fermentación de lactosa y glucosa, además de la formación de ácido sulfhídrico.

 

·         Se solidifica en forma inclinada permitiendo tener dos cámaras de crecimiento una aeróbica, en el pico de flauta y la otra anaeróbica, en el fondo del tubo.

 

Características

·         Medio diferencial, basado en la fermentación glucosa y lactosa, formación H2S, formación de gas, movilidad – ruptura del medio, en tubo inclinado, cambios de color Acido/Acido – no hay cambio.

·         PH= 7.4 +/- 0.2.

·         Indicador: Rojo fenol.

·         Se desarrolla en un medio ligeramente alcalino.

·         Genera una condición aerobia.

·         La producción del H2S se debe a que se utiliza el biosulfato de sodio.

 

Método de preparación

·         Suspender 52g en 1000 ml de agua hervir durante un minuto en un tubo inclinado.

 

52g __________________1000ml

2.6g___________________50ml

Siembra

Por picadura en el agar y estría en la superficie inclinada

Incubación

de 18 – 24 horas y de 35 – 37 ºC con condiciones aerobias.

 

Limitaciones

·         Los resultados deben ser leídos luego de 18-24 hrs de incubación, después de este tiempo pueden ser falsos por el consumo de peptonas.

·         Si la concentración de H2S es elevada lleva al ennegrecimiento.

·         Usar agujas de inoculación.

 

 

Caldo de urea

 

Es un medio solido diferencial para microorganismos, en especial los miembros de la especie enterobacteria, según su capacidad de producir ureasa.

·         Medio de cultivo sólido.

·         Medio de cultivo diferencial.

·         Solo se utiliza para bacterias Gram Negativo.

·         Se utiliza para diferenciar (Proteus,  salmonella y shigella).

 

La ureasa es una enzima que cataliza la hidrolisis de urea dióxido de carbono y amoniaco.

 

Prueba rapida:

Se realiza a partir de la muestra de la biopsia que se inocula en un medio para la determinación de urea, como por ejemplo, caldo urea o cris tensen. Evidencia, cuando es positiva que puede tratarse de Pylori.

Características

·         Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes de que la bacteria muestre un crecimiento aceptable no podrá determinarse con exactitud.

·         Cuando da negativo la bacteria no utiliza el amoniaco como fuente de nitrógeno.

·         Sembrar el medio de cultivo con el cultivo puro de ensayo. Incubar 24 – 48 horas a 35 ºC. En ocasiones hasta 72 horas.

·         No se recomienda para las bacterias con reacción de ureasa retardada.

·         Indicador: Rojo fenol.

·         PH: 6.8 +/- 0.2 = ligeramente alcalino.

 

Concentración

3.87 g _______________________ 1000ml

1.93 g________________________50 ml

Agar Mac Conkey

·         Es un medio selectivo diferencial.

·         Aísla y deferencia bacilos gram negativo.

·         Fermentadores y no fermentadores de lactosa.

·         La azúcar fermentable es la lactosa.

·         El indicador: Rojo neutro.

·         Tiene un pH final 7.1 +/- 0.2, ligeramente básico.

·         Cuando es negativo no hay fermentación de lactosa.

 

 

 

EMB

·         Es un medio selectivo diferencial para enterobacterias Gram negativas.

·         Contiene lactosa y sacarosa.

·         El indicador es la eosina y el azul de metileno.

·         Afinidad por el fosfato dipotásico.

·         Se prepara en placa.

·         PH: 7.2 +/- 0.2, ligeramente básico.

·         Las sepas que se identifican son verde brillante (son de E. coli y citrobacter).

 

 

 

                           TSI Agar

Medio universalmente empleado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y a la producción de ácido sulfhídrico.

Fundamento

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Extracto de carne	3.0	Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
Pluripeptona	20.0
Cloruro de sodio	5.0
Lactosa	10.0
Sacarosa	10.0
Glucosa	1.0
Sulfato de hierro y amonio	0.2
Tiosulfato de sodio	0.2
Rojo de fenol	0.025
Agar	13.0
pH final: 7.3 ± 0.2

Siembra   

A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI, picando el fondo y extendiendo sobre la superficie del medio.
Incubación     

A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis.

Resultados

 

1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la glucosa.
   

2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
   

3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azúcares.

4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
   

5-El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido sulfhídrico.

Microorganismo	Pico/Fondo	Producción de gas	Producción deácido sulfhídrico
E. coli ATCC 25922	A/A	+	-
K. pneumoniae ATCC 700603	A/A	+	-
P. mirabilis ATCC 43071	K/A	+	+
S. typhimurium ATCC 14028	K/A	-	+
S. enteritidis ATCC 13076	K/A	+	+
S. flexneri ATCC 12022	K/A	-	-
P. aeruginosa ATCC 27853	K/K	-	-

 

A: ácido
K: alcalino

Características del medio

Medio preparado: rojo
Almacenamiento

Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-134-05	x 500g :Código:  B02-134-06

E.M.B. Agar. (22/10/14)

 

Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

 

Fundamento

Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Peptona	10.0	Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5 minutos; mezclar, calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos hasta su disolución. Esterilizar en autoclave a no más de 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°C y distribuir agitando suavemente.
Lactosa	5.0
Sacarosa	5.0
Fosfato dipotásico	2.0
Agar	13.5
Eosina	0.4
Azul de metileno	0.065
pH final: 7.2 ± 0.2

     

Siembra En superficie, por estriado a partir de un inóculo poco denso, para obtener colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

IncubaciónDe 24 a 48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados

Microorganismos	Tipo de Colonia
Escherichia coli ATCC 25922	Verdosas con brillo metálico y centro negro azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603	Mucosas, rosa púrpura, confluentes
Proteus mirabilis ATCC 43071	Incoloras
Enterococcus faecalis ATCC 29212	Incoloras, pequeñas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022	Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028	Incoloras

     

Características del medio:

Placas preparadas: color púrpura.

La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.
Almacenamiento:Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-101-05	x 500g :Código:  B02-101-06	6 x 50 ml: B04-101-84